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实验室无菌室的检查标准与方法

时间: 2024-11-08 23:16:37 |   作者: 澳客电脑app官网下载

  大小的布片或铝片,高压灭菌后用作载体;每个载体上滴一滴制备好的菌悬液,干燥后备用;将

  无菌室空气质量的检查应按照采样计划,依据情况对处于空态、静态或正常运行的风险区,使用适当的仪器采集空气中微生物,测定并监测风险区空气的微生物污染。无菌室空气质量的检查可以借鉴GB/T 16293 《医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法》和GB/T 25915.7《洁净室及相关受控环境 第7部分:隔离装置(洁净风罩、手套箱、隔离器、微环境)》。

  面积小于30m2的室内设一条对角线点,在其中心以及两端距墙1m处各取1点;面积大于30m2的室内房间四面距墙1m和中央各放置一个平皿,高度为实验台高度。培养基平皿开盖暴露10min,然后盖上盖子倒放,培养48h,计数每个平皿上的菌落数。日常监控时,可以设定可接受的菌落数限值。一般无菌室所有的取样平皿上的细菌总数应小于15个。空气质量良好的无菌室,通常么个平皿上生长的细菌不超过

  2.空气过滤法:空气采样除了自然沉降法外,还能够正常的使用专门的主动式采样器。主动式采样器可以评估风险区空气微生物的特征。主动式采样器最重要的包含过滤采样器、撞击采样器、冲击采样器等。

  撞击采样器可大致分为狭缝式采样器、离心式采样器和针孔式采样器。狭缝式采样器由附加的真空抽气泵抽气,通过采样器的缝隙式平板,将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上,附着的活微生物粒子经过培养后形成菌落,予以计数。离心式采样器由于内部风机的非常快速地旋转,气流从采样器前部吸入从后部流出,在离心机的作用下,空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上,经培养后形成菌落,予以计数。

  过滤式空气采样器是最常用、最简单的空气采样器。过滤式采样器有采样头、滤器、流量计和抽气泵组成。过滤式采样器的结构如图:

  开动电机后,抽气泵工作,带动空气吸入采样头,空气通过滤器的时候,大于滤膜孔径的颗粒被阻留,当达到预先设定吸气体积后抽气泵停止工作,将滤膜取出转贴到培养基上,培养后计算空气中微生物的浓度。过滤式采样器捕获效率高,但是滤膜材料可能会影响微生物的存活率,还有采样阻力大、流量易变的缺陷。

  在没有空气采样器的情况下,能自己组装如下图的空气错率采样装置,注意组装连接处必须密不透风。

  空气通过小瓶中的无菌水,也就是4L空气中的微生物被留存在50mL无菌水中。无菌吸取1mL过滤的水样进行平板计数,做2个平行。37℃培养48h计数。每升空气中的细菌数为:2个平皿上细菌数量的平均值×

  三、无菌室物体表面微生物污染检查表面微生物污染的检查需要用接触器或拭子,获得某表面某时间点的微生物数量。

  2,均匀用力将整个营养介质压住表面几秒钟,不得移动。然后将装置放回容器内,再清洁采样表面,清除残留营养物。接触器培养后显现的菌落能给出原表面微生物的存活状况的镜像“图”。使用拭子更简单和灵活,用拭子擦拭某个表面,它抹去的微生物数量就可以计算出了。对接触装置触及不到的、不平或有凹陷的非吸收性大表面,用拭子采样特别方便。棉拭子的操作方法如下:

  准备材料:自制无菌棉拭子或购买商品化的无菌棉拭子、内径10cm×10cm无菌规格板、无菌生理盐水、培养基平皿。

  如果取样物体是平面的,将无菌规格板放在物体表面,用浸湿的无菌棉拭子在无菌规格板空心处横竖涂抹均匀,涂抹时随之转动棉拭子,剪去棉拭子与手接触部分,将棉拭子放入装有一定体积的无菌生理盐水中待检。

  将采样管敲打80次以上是棉拭子上的细菌充分扩散,做适当稀释,进行平板计数,37℃培养48h计数。

  CFU/cm2)=(平皿上菌落平均数*稀释倍数)/采样面积(cm2)【例10.1】某操作台面采样面积100

  cm2,棉拭子放入10 mL生理盐水,从中取1mL检测,平皿上平均菌落数为5个。则细菌总数为:5x10/100=0.5(CFU/

  cm2,取整件物品进行棉拭子涂抹取样,其余步骤同上。细菌总数(CFU/件) =平皿上菌洛平均数×稀释倍数/件

  被检人员洗手消毒后,五指并拢。将浸泡过的棉拭子沿双手指屈从指根到指端往返涂擦两次,涂擦的同时转动棉拭子。剪去操作者手接触部位,将棉拭子放入装有一定体积的无菌室生理盐水中待检。

  按“无菌室物体表面细菌污染检查”的办法来进行样品处理、接种、培养、计数和报告结果。

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